|
Szanowni Państwo,
kontynuując serię spotkań edukacyjnych poświęconych technologii real-time PCR dostosowujemy się do oczekiwań jakie przekazali nam w ankietach i bezpośrednich rozmowach uczestnicy poprzednich spotkań z tej tematyki. Tym razem proponujemy formułę seminarium i warsztatów, podczas których każdy uczestnik będzie mógł krok po kroku zaplanować zakup sprzętu i wdrożenie technologii, przystosowanie ich do własnych potrzeb, zaprojektowanie reakcji i niezbędnych odczynników. Zaplanowaliśmy dla Państwa zajęcia w małych grupach z wykorzystaniem komputerów oraz bezpłatnego i komercyjnego oprogramowania. Istotną częścią spotkania będzie możliwość skonsultowania własnych wyników z grupą specjalistów, od lat działających w różnych obszarach aplikacyjnych.
dr Tomasz Bykowski
Prezes Zarządu
Centrum Edukacji Medycznej CEMED
ZAPRASZAMY:
biologów molekularnych i biotechnologów, diagnostów laboratoryjnych, pracowników stacji epidemiologicznych i stacji krwiodawstwa, pracowników zakładów kryminalistyki, studentów i pracowników naukowych.
Kierownik merytoryczny: dr Izabela Sitkiewicz, Narodowy Instytut Leków
PROGRAM
|
9.40
|
Rozpoczęcie spotkania i powitanie uczestników
dr Tomasz Bykowski
|
5 min
|
|
9.45
|
Wykład wprowadzający:
Podstawy i kierunki rozwoju technik real-time PCR
- RT-PCR to zbór technik, które można użyć do różnych zastosowań a nie jedna technika
- Podstawowe różnice między klasycznym PCR, Real-Time PCR a ilościowym PCR (qPCR)
- Zasada działania techniki
- Amplifikacja i detekcja
- Główne typy urządzeń i detekcji – typy źródeł światła
- Wzbudzenie fluoroforu i detekcja – filtry i długości fal
- Kapilary, probówki, płytki 96/384
- Typy używanych barwników
- Reakcje typu multiplex
- Rodzaje sond i metody detekcji
- SYBR green
- Sondy hybrydyzujące
- Sondy hydrolizowane (TaqMan)
- Molecular Beacon
- Scorpion
- Terminologia używana w opisie reakcji
- Podstawy pomiaru ilości produktu
- Metody bezpośrednie oparte na krzywej wzorcowej
- Metody relatywne
- Podstawowe zastosowania
- proste pomiary ilości DNA
- mierzenie poziomu ekspresji genów
- wykrywanie mutacji i polimorfizmów
- Perspektywy
dr Izabela Sitkiewicz, Narodowy Instytut Leków
|
45 min
|
|
10.30
|
Praktyczne rady dotyczące zakupu i eksploatacji urządzeń Real-time PCR
- funkcje podstawowe
- funkcje zaawansowane
- certyfikaty
- koszty eksploatacji
- odczynniki i gotowe zestawy
- kontrola jakości
dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny
|
30 min
|
|
11.00
|
Przerwa obiadowa
|
50 min
|
|
Blok warsztatowy
|
|
11.50
|
Grupa I
Zajęcia przy komputerach: Projektowanie sond i primerów
dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
Grupa II
Planowanie, czyli najpierw zastanów się, co chcesz zrobić
- DNA czy RNA?
- Eukarionty czy prokarionty?
- Detekcja czy wyznaczanie ilości?
- Pomiar bezpośredni czy metody referencyjne?
- Wyznaczenie genu referencyjnego
- Singleplex czy multiplex?
- ...
Opracowanie protokołu w zależności od zadania
- Wybór chemii reakcji
- Wybór/projektowanie sond i starterów
- Wybór odpowiedniej mieszaniny reakcyjnej
- problemy z interpretacją wyników otrzymanych metodami "home-made"
- Pipetowanie, czyli o kontrolach i powtórzeniach
- standaryzacja i certyfikacja metod wewnątrzlaboratoryjnych
- Program amplifikacji
- ...
Testowanie warunków reakcji
- Krzywe wzorcowe
- Magiczny wzór y=-3.33x + a
Zajęcia interaktywne: Eksperyment i jego interpretacja
Przykładowe 2 lub 3 eksperymenty pokazane od krzywej do wyniku przedstawiają prowadzący
Jak dopasować technikę real-time PCR do własnych potrzeb - omówienie projektów uczestników
dr Izabela Sitkiewicz, Narodowy Instytut Leków w Warszawie
dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny
|
120 min
|
|
13.50
|
Przerwa kawowa
|
20 min
|
|
14.10
|
Grupa I
Planowanie, czyli najpierw zastanów się, co chcesz zrobić
- DNA czy RNA?
- Eukarionty czy prokarionty?
- Detekcja czy wyznaczanie ilości?
- Pomiar bezpośredni czy metody referencyjne?
- Wyznaczenie genu referencyjnego
- Singleplex czy multiplex?
- ...
Opracowanie protokołu w zależności od zadania
- Wybór chemii reakcji
- Wybór/projektowanie sond i starterów
- Wybór odpowiedniej mieszaniny reakcyjnej
- problemy z interpretacją wyników otrzymanych metodami "home-made"
- Pipetowanie, czyli o kontrolach i powtórzeniach
- standaryzacja i certyfikacja metod wewnątrzlaboratoryjnych
- Program amplifikacji
- ...
Testowanie warunków reakcji
- Krzywe wzorcowe
- Magiczny wzór y=-3.33x + a
Zajęcia interaktywne: Eksperyment i jego interpretacja
Przykładowe 2 lub 3 eksperymenty pokazane od krzywej do wyniku przedstawiają prowadzący
Jak dopasować technikę real-time PCR do własnych potrzeb - omówienie projektów uczestników
dr Izabela Sitkiewicz, Narodowy Instytut Leków w Warszawie
dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny
Grupa I
Zajęcia przy komputerach: Projektowanie sond i primerów
dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
|
120 min
|
|
16.10
|
Zakończenie spotkania
|
|
|
