ZAPRASZAMY:
diagnostów laboratoryjnych, biologów molekularnych i biotechnologów, pracowników stacji epidemiologicznych i stacji krwiodawstwa.

Prowadzący:

• dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
• dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny

Umiejętności jakie muszą posiadać uczestnicy warsztatów przed przystąpieniem do zajęć:

• elementarne zasady pracy w laboratorium (praca jałowa, obsługa pipet automatycznych)
• przydatna będzie znajomość podstaw PCR
• z warsztatów skorzystają również osoby, które zetknęły się już z technologią Real-time PCR (wartością będzie możliwość konsultacji trudniejszych przypadków z doświadczonymi użytkownikami różnych platform sprzętowych, praktykami w dziedzinie molekularnych technik diagnostycznych)

Umiejętności jakie nabędą uczestnicy warsztatów:

• dobór i zakup sprzętu do prowadzenia reakcji Real-time PCR
• izolacja kwasów nukleinowych z prób klinicznych na potrzeby diagnostyki opartej o Real-time PCR
• przeprowadzanie reakcji i rozwiązywanie problemów technicznych związanych z obsługą sprzętu
• analiza wyników i ich przygotowanie na potrzeby odbiorców (lekarzy, pacjentów etc.)
• rozpoznanie kontekstu klinicznego wykonywanych analiz i umiejętność doradzenia w zakresie doboru materiału do badań oraz oceny jakościowej i ilościowej wyników

Zajęcia praktyczne oparte będą o następujące reakcje, znajdujące zastosowanie w molekularnej diagnostyce medycznej:

• ilościowe badanie obecności wirusa CMV z użyciem fluorochromu SYBR Green
• ilościowe badanie obecności wirusa EBV z wykorzystaniem sond LightCycler oraz analizy krzywych topnienia produktów reakcji PCR
• zastosowanie multiplex qPCR do wykrywania obecności mutacji w genie K-RAS (diagnostyka molekularna w terapii celowanej raka jelita grubego)

Fotorelacja z poprzedniej edycji warsztatów, które odbyły się 15-16 czerwca w Poznaniu

PROGRAM

DZIEŃ 1 | 24 sierpnia 2009
10.20	Rozpoczęcie warsztatów	10 min
10.30	Wykład: Podstawy techniki Real-time PCR podstawowe różnice między klasycznym PCR, Real-Time PCR a ilościowym PCR (qPCR), terminologia stosowana do opisu technik PCR w czasie rzeczywistym rodzaje sond i metod detekcji kwasów nukleinowych stosowanych w urządzeniach real-time PCR (SYBR Green, TaqMan, Molecular Beacons, Scorpions etc.) przegląd głównych grup zastosowań (proste pomiary ilości DNA, mierzenie poziomu ekspresji genów, wykrywanie mutacji i polimorfizmów etc.) ograniczenia metody Real-time PCR dr Marcin Hołysz  notka, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu	45 min
11.15	Przedstawienie planu zajęć praktycznych (przekazanie protokołów i omówienie ćwiczeń)	15 min
11.30	Zajęcia praktyczne: Przygotowanie matrycy do reakcji PCR, czyli izolacja DNA z próbek klinicznych	105 min
13.15	Przerwa na obiad	45 min
14.00	Zajęcia praktyczne: Zapoznanie się z urządzeniem do prowadzenia reakcji PCR z możliwością pomiaru w czasie rzeczywistym zasada działania aplikacje software	30 min
14.30	Przygotowanie i przeprowadzenie reakcji: Ilościowe badanie obecności adenowirusów z użyciem sondy TaqMan	75 min
15.45	Przerwa na kawę	30 min
16.15	Wykład: Zastosowania techniki Real-Time PCR w diagnostyce medycznej: Przekazywanie próbek od pacjenta do laboratorium (specyfika przechowywania i transportu materiału przeznaczonego do izolacji DNA) - próbki śliny, krwi, zastosowanie kart typu FTA etc. zakres czułości (uwagi praktyczne w kontekście badań diagnostycznych) przegląd testów opartych o Real-time PCR uwzględnionych w protokołach leczenia przyjętych w Polsce dr Tomasz Dzieciątkowski  notka, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny	45 min
17.00	Analiza, omówienie wyników oraz sformułowanie diagnozy z reakcji: Ilościowe badanie obecności adenowirusów z użyciem sondy TaqMan	30 min
17.30	Zakończenie dnia
DZIEŃ 2 | 25 sierpnia 2009
9.00	Rozpoczęcie warsztatów	10 min
9.10	Przygotowanie i przeprowadzenie reakcji: Ilościowe badanie obecności wirusa EBV z wykorzystaniem sond LightCycler oraz analizy krzywych topnienia produktów reakcji PCR	60 min
10.10	Wykład: Praktyczne rady dotyczące zakupu i eksploatacji urządzeń Real-time PCR (cz. I) funkcje podstawowe funkcje zaawansowane certyfikaty dr Marcin Hołysz  notka, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu	30 min
10.40	Wykład: Praktyczne rady dotyczące zakupu i eksploatacji urządzeń Real-time PCR (cz. II) koszty eksploatacji odczynniki i gotowe zestawy startery, czy warto projektować własne? kontrola jakości (kontrole dostarczane przez producentów zestawów oraz firmy zewnętrzne) dr Tomasz Dzieciątkowski  notka, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny	30 min
11.10	Analiza, omówienie wyników oraz sformułowanie diagnozy z reakcji: Ilościowe badanie obecności wirusa EBV z wykorzystaniem sond LightCycler oraz analizy krzywych topnienia produktów reakcji PCR	30 min
11.40	Przerwa na kawę	30 min
12.10	Przygotowanie i przeprowadzenie reakcji: Genotypowanie pojedynczonukleotydowych zmian (SNPs) metodą High Resolution Melting (HRM)	60 min
13.10	Wykład i dyskusja: Rozwiązywanie problemów interpretacji i opracowania wyników na potrzeby lekarzy klinicystów oraz badań epidemiologicznych dr Tomasz Dzieciątkowski  notka, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny	40 min
13.50	Przerwa na obiad	40 min
14.30	Genotypowanie pojedynczonukleotydowych zmian (SNPs) metodą High Resolution Melting (HRM) Zastosowania w onkologii i genetyce medycznej	30 min
15.00	Sesja "TROUBLESHOOTING", czyli wspólne rozwiązywanie problemów technicznych omówienie typowych problemów omówienie przypadków przedstawionych przez uczestników spotkania dr Tomasz Dzieciątkowski  notka, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny dr Marcin Hołysz  notka, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu	45 min
15.45	Zakończenie dnia