Szanowni Państwo,
w styczniu 2009 roku spotkaliśmy się w ponad stuosobowym gronie osób zainteresowanych zastosowaniami real-time PCR w diagnostyce medycznej. W październiku spotkamy się ponownie w Warszawie, aby mówić szerzej o trendach polskich i światowych, oraz o wdrożeniach jakościowych i ilościowych badań kwasów nukleinowych z wykorzystaniem technologii real-time PCR. Bedzie okazja zasiąść do rozmów w małych grupach i rozwiazać prawdziwe problemy związane z codzienną praktyką laboratoryjna. Do Państwa dyspozycji będzie grono ekspertów, a także firm produkujących sprzęt i odczynniki wykorzystywane w wiodących laboratoriach. Niech materiały drukowane i notatki staną się dla Państwa kompendium wiedzy, do którego zaglądać będziecie Państwo w swojej pracy zawodowej na co dzień.
Zapraszam i do zobaczenia na seminarium,

dr Tomasz Bykowski
Prezes Zarządu
Centrum Edukacji Medycznej CEMED

ZAPRASZAMY:
biologów molekularnych i biotechnologów, diagnostów laboratoryjnych, pracowników stacji epidemiologicznych i stacji krwiodawstwa, pracowników zakładów kryminalistyki, studentów i pracowników naukowych.

Podstawowy pakiet praktycznej wiedzy przed, w trakcie i po wdrożeniu technologii real-time PCR w Twoim laboratorium!

Sesja TROUBLESHOOTING z udziałem wybitnych ekspertów krajowych i europejskich – rozwiązywanie konkretnych problemów, porady ekspertów i wymiana doświadczeń.

Trudne pytania, na które postaramy się odpowiedzieć podczas seminarium:

• Jak zaplanować własny eksperyment real-time PCR najlepiej jak to możliwe?
• Jak skorzystać z bezpłatnego i komercyjnego oprogramowania do projektowania primerów (starterów) i sond unikając pomyłek i minimalizując koszty zakupu odczynników?
• Jak unikać i jak rozwiązywać realne problemy pojawiające się w trakcie eksploatacji urządzeń?
• Jak walidować metodę badawczą real-time PC?
• Jak kształtować i kontrolować jakość wyników uzyskiwanych metodą real-time PCR?

PROGRAM

9.45	Rozpoczęcie spotkania	15 min
BLOK TEMATYCZNY: Trendy w rozwoju technologii PCR w czasie rzeczywistym
10.00	Wykład wprowadzający: Podstawy i kierunki rozwoju technik real-time PCR RT-PCR to zbór technik, które można użyć do różnych zastosowań a nie jedna technika Podstawowe różnice między klasycznym PCR, Real-Time PCR a ilościowym PCR (qPCR) Zasada działania techniki Amplifikacja i detekcja Główne typy urządzeń i detekcji – typy źródeł światła Wzbudzenie fluoroforu i detekcja – filtry i długości fal Kapilary, probówki, płytki 96/384 Typy używanych barwników Reakcje typu multiplex Rodzaje sond i metody detekcji SYBR green Sondy hybrydyzujące Sondy hydrolizowane (TaqMan) Molecular Beacon Scorpion Terminologia używana w opisie reakcji Podstawy pomiaru ilości produktu Metody bezpośrednie oparte na krzywej wzorcowej Metody relatywne Podstawowe zastosowania proste pomiary ilości DNA mierzenie poziomu ekspresji genów wykrywanie mutacji i polimorfizmów Perspektywy dr Izabela Sitkiewicz  notka, Narodowy Instytut Leków	45 min
10.45	Wykładu i pokaz, część I: Praktyczne aspekty użytkowania urządzeń real-time PCR (wykład i pokaz prowadzone w języku angielskim) dr Steffen Mueller, Senior Application Scientist, Agilent Technologies	30 min
11.15	Pomiar poziomu RNA w badaniach podstawowych dr Marcin Hołysz  notka, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu	30 min
11.45	Zastosowanie real-time PCR w diagnostyce molekularnej raka jelita grubego oraz raka płuc Andrzej Tysarowski, Zakład Biologii Molekularnej,Centrum Onkologii - Instytut w Warszawie	15 min
12.00	Przerwa kawowa	20 min
BLOK TEMATYCZNY: Praktyczne aspekty zastosowań technik real-time PCR
12.20	Zastosowania real-time PCR w medycynie i diagnostyce klinicznej dr Tomasz Dzieciątkowski  notka, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny	20 min
12.40	Zastosowanie techniki real-time PCR w badaniach żywności genetycznie modyfikowanej (GM) w świetle wymagań europejskich i światowych Regulacje prawne i rekomendacje międzynarodowych organizacji certyfikujących w zakresie badań żywności GM. Zastosowanie techniki real-time PCR w badaniu żywności GM. Praktyczne uwagi dotyczące zastosowań real-time PCR w badaniu żywności GM. mgr Bartosz Rogoziński  notka, Wojewódzka Stacja Sanitarno-Epidemiologiczna w Poznaniu	20 min
13.00	PerkinElmer Automated solution for Real time PCR Davide Tonetto, PerkinElmer Italy	20 min
13.20	Wykładu i pokaz, część II: Praktyczne aspekty użytkowania urządzeń real-time PCR (wykład i pokaz prowadzone w języku angielskim) dr Steffen Mueller , Senior Application Scientist, Agilent Technologies	60 min
14.20	Optymalizacja reakcji real-time PCR optymalizacja temperatury i czasu reakcji odpowiedni dobór składu mieszaniny reakcyjnej (stężenie, budowa starterów). zmniejszanie objętości i skracanie czasu reakcji zwiększenie powtarzalności poprzez automatyzację procesu przygotowania reakcji dr inż. Łukasz Aleksandrzak, MERANCO	20 min
14.40	Przerwa obiadowa	50 min
15.30	Sesja TROUBLESHOOTING – stoły dyskusyjne: Stół A: Rozwiązywanie problemów technicznych – TROUBLESHOOTING (dyskusja w jęz. angielskim) dr Steffen Mueller, Senior Application Scientist, Agilent Technologies Stół B: Projektowanie sond i primerów (bezpłatne i komercyjne oprogramowanie) dr Marcin Hołysz  notka, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu ogólne zasady projektowania starterów, projektowanie sond (TaqMan, HybProbe, SimpleProbe, etc.), oznaczenia jakościowe czy ilościowe (dobór właściwego systemu detekcji), specyficzność względem DNA genomowego czy cDNA (mRNA), sprawdzanie specyficzności – BLAST, optymalizacja warunków reakcji, projektowanie starterów i sond do reakcji multiplex, programy do projektowania starterów i sond (bezpłatne i komercyjne), korzystanie z biblioteki sond hydrolizujących Universal Probe Library (Roche Diagnostics) nukleotydy LNA, sondy MGB jakie ilości starterów i sond zamówić koszty zakupu, nazewnictwo i sposoby przechowywania Stół C: Jak dopasować technikę real-time PCR do własnych potrzeb dr Izabela Sitkiewicz  notka, Narodowy Instytut Leków Planowanie, planowanie, planowanie, czyli najpierw zastanów się, co chcesz zrobić DNA czy RNA? Eukarionty czy prokarionty? Detekcja czy wyznaczanie ilości? Pomiar bezpośredni czy metody referencyjne? Wyznaczenie genu referencyjnego Singleplex czy multiplex? Opracowanie protokołu w zależności od zadania Wybór chemii reakcji Wybór/projektowanie sond i starterów Wybór odpowiedniej mieszaniny reakcyjnej Pipetowanie, czyli o kontrolach i powtórzeniach Program amplifikacji Testowanie warunków reakcji Krzywe wzorcowe Magiczny wzór y=-3.33x + a Eksperyment i jego interpretacja Stół D: Jak dopasować technikę real-time PCR do własnych potrzeb i specyfiki zastosowań medycznych dr Tomasz Dzieciątkowski  notka, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny badanie prokariotycznego DNA / RNA określienie czy niezbędna jest detekcja czy wyznaczanie ilości projektowanie kontroli wewnętrznych i wyznaczeniu genu IC dobór reagentów i chemii reakcyjnej optymalizacja warunków reakcji problemy z interpretacją wyników otrzymanych metodami "home-made" standaryzacja i certyfikacja metod wewnątrzlaboratoryjnych Stół E: Kształtowanie i kontrola jakości analiz real-time PCR mgr Bartosz Rogoziński  notka, Wojewódzka Stacja Sanitarno-Epidemiologiczna w Poznaniu Przeprowadzanie wiarygodnych pomiarów metodami biologii molekularnej (30 min.) prawidłowe zdefiniowanie procesu analitycznego 6 zasad rzetelnych pomiarów (VAM) najczęstsze przeszkody w uzyskiwaniu prawidłowych wyników Zapewnianie jakości w analitycznym laboratorium biologii molekularnej (30 min.) systemy zarządzania, krótka charakterystyka i porównanie 4 międzynarodowych standardów: ISO 9001:2000, ISO/IEC 17025:2005, ISO 15189:2003 oraz GLP aspekty systemu zarządzania jakością dotyczące analiz: procedury, środowisko pomiarów, sprzęt, odczynniki, analitycy, metody, sterowanie jakością, próbki, zapisy i archiwizacja danych na przykładzie PN-EN ISO/IEC 17025:2005 Walidacja metod badawczych: (30 min.) dlaczego i kiedy walidacja metod badawczych jest niezbędna planowanie procesu walidacji parametry walidacji dla metod real-time PCR walidacja w praktyce Stół F: Automatyzacja w metodzie real-time PCR Davide Tonetto, Krzysztof Kossakowski, Maciej Stopa, PerkinElmer oraz Iwona Wach, Andrzej Suder, Łukasz Aleksandrzak, Meranco Aparatura Kontrolno-Pomiarowa i Laboratoryjna Sp. z o.o. Dobór właściwej platformy automatyzującej przygotowanie próbki do analizy metodą real-time PCR izolacja kwasów nukleinowych normalizacja kwasów nukleinowych przygotowanie reakcji PCR obróbka post-PCR Podniesienie jakości wykonywanych badań dzięki zastosowaniu automatycznej platformy przygotowania próbek Optymalizacja protokołów a obniżenie kosztów przygotowania reakcji real-time PCR Stół G: Specjalne zastosowania: Aplikacje metody real-time PCR w kryminalistyce. dr hab. n. med. Rafal Płoski – Kierownik, Zakład Genetyki Medycznej, Uniwersytet Medyczny w Warszawie wykrywanie i oznaczanie ilościowe całkowitego ludzkiego DNA wykrywanie i oznaczanie ilościowe męskiego DNA wykrywanie inhibitorów reakcji PCR zestawy komercyjne do ilościowego oznaczania ludzkiego DNA dostępne na rynku real-time PCR w identyfikacja płynów ustrojowych	90 min
17.00	Zakończenie spotkania i rozdanie certyfikatów